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No.25(2014) >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10087/8912

Title: 強制発現系を用いた大腸菌における緑色蛍光タンパク質の発現に対する グルコース,イソプロピル β-D-チオガラクトピラノシド, 及び,サイクリックAMP の効果
Other Titles: Effect of Glucose, Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside, and Cyclic AMP on Green Fluorescence Protein Expression in Escherichia coli
Authors: 大竹, 里美
小林, 葉子
Otake, Satomi
Kobayashi, Yoko
Keywords: 緑色蛍光タンパク質
green fluorescence protein
protein expression
isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside
Escherichia coli
Issue Date: 20-Dec-2014
Citation: 桐生大学紀要 25, 91-97, 2014-12
Abstract: pGreen-BSK+ プラスミドは,強い蛍光強度を持つ緑色蛍光タンパク質 (GFP) 遺伝子,gfp,を含んでいる. pGreen-BSK+ よりgfp を切り出し,大腸菌用タンパク質発現ベクターであるpET19b に挿入し,pGreen-ET19 を作 成した.pGreen-ET19b を大腸菌BL21(DE3) に形質転換し,大腸菌内でGFP が合成されることを確認した.基底レ ベルの大腸菌内のタンパク質の発現は 0.5-1% グルコースで阻害されること,サイクリックAMP (cAMP) によりタ ンパク質の発現が誘導されることが報告されている.そこで,0-100 mM グルコース,タンパク質発現誘導剤イソ プロピルβ-D-チオガラクトピラノシド (IPTG) 及びcAMP によるGFP の発現に対する効果を検討した.基底レベル のGFP の発現は,10 mM 以上のグルコースにより抑制された.IPTG は,0 mM グルコースでGFP の発現量の少な い大腸菌クローンにおいて,10 mM 以上のグルコースが存在する場合でもGFP の発現を誘導した.しかし,基底 レベルのGFP の発現量の多い大腸菌クローンにおいては,IPTG は大腸菌の増殖を抑制した.cAMP による付加的 な効果は確認されなかった.グルコース存在下におけるIPTG による大腸菌の増殖抑制は,予想外の結果であり, 今後の検討が必要とされる.
The pGreen-BSK+ plasmid includes a green fluorescence protein (GFP)-encoding gene, gfp. GFP expresses strong green fluorescence. The gfp region from pGreen-BSK+ was inserted into an Escherichia coli expression vector, pET19b, for the construction of pGreen-ET19 plasmid. After transfection of pGreen-ET19 into an E. coli strain BL21(DE3), GFP was expressed in BL21(DE3) under normal conditions. It has been shown that basal GFP expression is suppressed in the presence of 0.5–1% glucose. In this study, we analyzed the effect of glucose, cyclic AMP (cAMP), and the protein-expression inducer isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) on GFP expression using BL21(DE3) transfected with pGreen-ET19. GFP expression was suppressed in the presence of 10–100 mM glucose. E. coli cells, which expressed low levels of GFP on LB plates without glucose, showed higher, IPTG-induced GFP expression on LB plates with 10 mM and 100 mM glucose. E. coli cells expressing high levels of GFP on LB plates without glucose showed suppressed growth on LB plates supplemented with IPTG. cAMP did not appear to affect GFP expression. The observed suppression of E. coli growth was unexpected.  Further analysis of the relationship between E. coli growth suppression by IPTG and GFP expression is necessary.
URI: http://hdl.handle.net/10087/8912
ISSN: 21864748
Appears in Collections:No.25(2014)

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